Diagnosi di laboratorio: Malattia degli Edemi
Quali metodi diagnostici di laboratorio posso utilizzare per diagnosticare la Malattia degli Edemi?... Quale dovrei scegliere in base alla situazione?... Come interpreto i risultati?...
Test disponibili
Coltura batterica
- Isolamento di organismi viventi.
- Tipo di campione: feci, contenuto intestinale.
- Pro:
- I batteri sono facili da coltivare in 1 giorno.
- Facile da fare in qualsiasi laboratorio (anche interno).
- Costo relativamente basso.
- Contro:
- Alcuni E. coli fanno parte della flora intestinale normale.
- I suini hanno molteplici E. coli allo stesso tempo.
- Se i suini sono stati precedentemente trattati con antibiotici, questo può prevenire la crescita batterica.
Suscettibilità agli antimicrobici (antibiogramma)
- Test in vitro: capacità di un organismo vivente di crescere sotto specifiche concentrazioni di diversi antimicrobici.
- Tipo di campioni: feci, contenuto intestinale.
- Pro:
- Identificazione della suscettibilità o resistenza di ceppi specifici ai comuni antimicrobici.
- Identificazione dei trend di resistenza agli antimicrobici.
- Contro:
- Richiede un isolato batterico.
- I test in vitro possono differire leggermente dai risultati in vivo.
- Alcuni antimicrobici specifici potrebbero non essere inclusi o potrebbero richiedere test speciali separati.
- Costo moderato.
Istopatologia
- Valuta la presenza di lesioni tissutali (danno) che possono confermare la presenza di malattia. A volte la presenza di organismi può essere rilevata anche direttamente (batteri e parassiti) o indirettamente (virus) utilizzando speciali coloranti aggiuntivi.
- Tipo di campione: tessuti.
- Pro:
- Associa l'adesione batterica al danno intestinale.
- Non è necessaria alcuna colorazione speciale.
- Contro:
- I tessuti intestinali devono essere fissati con formaldeide entro 15 minuti dalla morte dell'animale poiché il tessuto intestinale si decompone rapidamente.
- La malattia può essere segmentaria, quindi è necessario inviare più campioni intestinali.
Genotipizzazione
- Una tecnica PCR (reazione a catena della polimerasi) che rileva la presenza di una sequenza specifica di acidi nucleici (DNA) associata a geni di virulenza noti.
- Pro:
- Eseguito mediante PCR; facile da fare.
- Aiuta a identificare la patogenicità rilevando la presenza di geni (non necessariamente espressione genica) associati a fattori di virulenza.
- Geni di tossine: EAST1, LT, STa, STb, Stx1, Stx2, Stx2e.
- Geni di Pilus: F18, F41, K88 (F4), K99 (F5), 987P (F6).
- Geni di adesine: AIDA, EAEA, PAA
- Facilita la corretta selezione del vaccino (basato sui pili).
- Aiuta a confermare che l'isolato ha i geni per la Malattia degli Edemi.
Geni di E. coli rilevati dalla genotipizzazione della PCR e dalla loro funzione. I geni evidenziati in rosso sono importanti per la diagnosi della Malattia degli Edemi.
| Gene | Tipo | Descrizione |
|---|---|---|
| EAST1 | Tossina | La tossina intestinale si lega allo stesso recettore e stimola la stessa via secretoria di Sta (la causa della diarrea non è ben stabilita) |
| LT | Tossina | Tossina intestinale che stimola la secrezione intestinale |
| STa | Tossina | Tossina intestinale che stimola la secrezione intestinale principalmente nei suini giovani (diminuisce l'assorbimento di acqua ed elettroliti) |
| STb | Tossina | Tossina intestinale che stimola la diarrea secretoria principalmente nei suini anziani (aumenta la secrezione di enterociti) |
| Stx1 | Tossina | La tossina intestinale può essere trovata in ceppi patogeni e non patogeni |
| Stx2 | Tossina | La tossina intestinale può essere trovata in ceppi patogeni e non patogeni |
| Stx2e | Tossina | Tossina sistemica che induce danno vascolare e Malattia degli Edemi |
| F18 (F107) | Adhesina | Pili (fimbria) utilizzato per l'adesione che è presente dopo i 20 giorni di età e comunemente associato a diarrea post-svezzamento e Malattia degli Edemi |
| F41 | Adhesina | Pili (fimbria) utilizzato per l'adesione principalmente nei neonati |
| K88 (F4) | Adhesina | Pili (fimbria) aderisce dalla nascita a tutte le età |
| K99 (F5) | Adhesina | Pili (fimbria) utilizzati per l'adesione principalmente nei neonati |
| 987P (F6) | Adhesina | Pili (fimbria) utilizzati per l'adesione principalmente nei neonati |
| AIDA | Adhesina | "Adesina coinvolta nell'adesione diffusa" non fimbriale, più comunemente riscontrata in combinazione con F18 |
| EAE | Adhesina | Adesina non fimbriale che contribuisce alle lesioni da adesione e da cancellazione ("attaching-and-effacing") |
| PAA | Adhesina | Adesina non fimbriale essenziale per il verificarsi di lesioni da adesione e cancellazione ("attaching-and-effacing") |
- Contro:
- Richiede isolamento batterico.
- I suini possono avere più di un ceppo contemporaneamente, quindi dobbiamo confidare di aver isolato il ceppo corretto.
- Prezzo moderato, ma di solito viene testato solo un isolato.
Interpretazione dei risultati:
Coltura batterica:
- Deve essere un E. coli emolitico.
Figura 1. Coltura pura di E. coli emolitico su agar sangue. L'area chiara intorno a ciascuna colonia batterica indica l'emolisi (ripartizione del sangue sulla piastra di agar). Fonte: Iowa State University, Laboratorio di Diagnostica Veterinaria, Sezione di Batteriologia. - Purezza:
- Crescita pura - altamente suggestiva che sta contribuendo alla malattia.
- Crescita mista: valore discutibile.
- Quantità:
- Alto: altamente suggestivo che stia contribuendo alla malattia.
- Moderato: interpretazione variabile.
- Basso: valore discutibile (potrebbe essere un contaminante).
- Nessuna crescita: animale eventualmente trattato in precedenza con antibiotici o agenti senza un contributo significativo.
Suscettibilità antimicrobica (antibiogramma):
- Suscettibile - Possibile buona scelta per il trattamento se l'antimicrobico può raggiungere il tessuto bersaglio.
- Resistente: selezionare un antimicrobico diverso.
- MIC: se viene eseguita la MIC (concentrazione minima inibente), è necessario assicurarsi che l'antimicrobico selezionato raggiunga il valore MIC indicato nell'organo bersaglio.
Istopatologia:
- Positivo: Forte associazione causale se è in grado di dimostrare lesioni intestinali con E. coli aderente alle cellule epiteliali.
-
Negativo: Nessuna lesione intestinale.
Genotipizzazione:
- La genotipizzazione è necessaria per confermare che l'isolato abbia fattori di virulenza associati alla Malattia degli Edemi.
- Deve essere F4 o F18.
- Deve avere una tossina simile a Shiga (Stx2e).
Scenario
Suini con diarrea post-svezzamento:
- Raccogliere tamponi rettali da 2 o più suini con diarrea, non trattati con antibiotici e inviarli per coltura batterica, antibiogramma e genotipizzazione.
- Eutanasia di 1-3 suinetti con diarrea che non hanno ricevuto cure. Raccogliere immediatamente 3 campioni di intestino da ogni suinetto e metterli in una soluzione di formaldeide. Raccogliere campioni intestinali freschi per inviarli refrigerati per coltura batteriologica, antibiogramma e genotipizzazione.