Dentre os agentes etiológicos causadores de gastroenterite em suínos, Clostridium e Escherichia coli ocupam papel de destaque, sendo considerados os mais importantes agentes bacterianos causadores de diarreia em leitões neonatais globalmente. Na suinocultura, o impacto das doenças causadas por Clostridium está geralmente associado com quadros de diarreias (de leve a grave) e aumento da taxa de mortalidade nas diferentes fases de produção. (FAIRBROTHER, 2011).

O Clostridium perfringens está entre os microrganismos com maior abrangência de toxinas, as quais possuem grande importância na quantidade, grau de toxicidade e letalidade (SONGER, 1997). Essas substâncias são altamente tóxicas e fatais, e podem ser classificadas como exotoxinas (toxinas extracelulares) de polipeptídios relativamente instáveis. O C. perfringens é caracterizado por ser uma bactéria em forma de bastonete, formadora de esporos semiterminais e microaerófilos, sobrevivendo assim em ambientes com pouca quantidade de oxigênio (BROOKS et al., 2010). As cepas de C. perfringens são semelhantes em aspectos bioquímicos e físicos de suas colônias e se diferenciam pelas estruturas antigênicas das toxinas presentes, sendo as cepas divididas em cinco tipos (A, B, C, D e E) devido à presença das quatro principais exotoxinas responsáveis por causar enfermidades, que são: alfa (α), beta (β), epsilon (ε) e iota (ɩ) (SMITH, 1979; NIILO, 1980; BEER, 1988; PENHA et al., 2005).

Clostridium perfringens tem ampla ocorrência no trato intestinal de suínos e está diretamente relacionado como causa de enterotoxemias, principalmente pela detecção das exotoxinas α (tipo A) e α e β (tipo C) (SONGER e UZAL, 2005; VIEIRA et al., 2008).

Avaliação laboratorial

Um produto natural a base de Tomilho, Alfarroba e Chicória foi avaliado no laboratório de microbiologia da Universidade Estadual de Londrina – PR para verificação da Concentração Inibitória Mínima (CIM) frente a 12 cepas de Clostridium perfringens. Os valores de CIM foram determinados pelo método de microdiluição, de acordo com o documento M07-A9 publicado pelo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI, 2012).

O produto foi solubilizado em solvente apropriado e diluído em diferentes concentrações para a avaliação da CIM. As bactérias foram cultivadas nos meios de cultura apropriados, a 37ºC durante 24 horas, e posteriormente diluídas em solução salina (0,9%) até obter-se a concentração de 106 células/ml. Em placas de microdiluição, foram diluídos 50% das suspensões bacterianas e 50% do composto em diferentes concentrações, diluído em meio de cultura apropriado. A cultura foi então incubada em jarra de anaerobiose com Gaspak (BD) a 37ºC por 24 horas e o crescimento bacteriano avaliado quanto à turbidez.

Para o ensaio com C. perfringens foram testadas concentrações de 0,039 a 5 mg/ml (0,0039 a 0,5%). Como controles de esterilidade foram utilizados Caldo Mueller-Hinton (MH, Difco^®) e MH contendo extrato; e como controle de viabilidade e crescimento celular, bactéria inoculada em MH. Após 24 horas de incubação a 37°C, a CIM foi definida como a menor concentração de agente antimicrobiano que inibiu o crescimento bacteriano visível. Todos os ensaios foram realizados em triplicata, no mínimo em três ocasiões diferentes.

Cepas bacterianas

Todos ensaios de atividade antibacteriana foram realizados utilizando cepas bacterianas (patogênicas e não patogênicas) de referência, doadas pelo Instituto Oswaldo Cruz (Rio de Janeiro, Brasil), e isolados bacterianos, provenientes de suínos, pertencentes à coleção do Laboratório de Bacteriologia Básica e Aplicada da Universidade Estadual de Londrina (Departamento de Microbiologia, Centro de Ciências Biológicas).

Resultados

O produto natural a base de Tomilho, Alfarroba e Chicória demonstrou atividade antimicrobiana frente a C. perfringens, apresentando a CIM abaixo da dose de uso (0,1 a 0,2%) para as 12 cepas avaliadas, conforme apresentado na Tabela 1.

Tabela 1. Valores de Concentração Inibitória Mínima (CIM) do produto Dysantic^® frente aos isolados de Clostridium perfringens.

Conclusão

Os resultados das Concentrações Inibitórias Mínimas do produto natural a base de Tomilho, Alfarroba e Chicória demonstraram que este possui atividade antibacteriana contra as 12 cepas de Clostridium perfringens, apresentando-se como uma alternativa à redução do uso dos antimicrobianos químicos.

BIBLIOGRAFIA

BEER, J. Infecções e intoxicações por Clostridium perfringens. Vol. 2. Doenças infecciosas dos animais domésticos. São Paulo. Ed. Roca. 1988.

BROOKS, G.F.; CARROLL, K.C.; BUTEL, J.S.; MORSE, S.A.; MIETZNER, T.A. Infecções Causadas por bactérias anaeróbicas. 25 ed. Microbiologia Médica. Inc: The McGraw-Hill Companies, 2010a. Tradução: Porto Alegre: Artmed. 2012.

NIILO, L. Clostridium perfringens in animal disease: a review of current knowledge. Vol. 21. The Candian Veterinary Journal. 1980.

PENHA, M.D.L.; BALDASSI, L.; CORTEZ, A.; PIATTI, R.M.; RICHTZENHAIN, L.J. Detecção dos genes das toxinas alfa (α), beta (β) e épsilon (ε) em amostras de Clostridium perfringens isoladas de bovinos pela reação em cadeia da polimerase (PCR). Vol. 72. Arquivo Instituto Biológico. 2005.

SMITH, L.D.S. Virulence factors of Clostridium perfringens. Reviews of Infectious Diseases. Vol. 1. 1979.

SONGER, J. G. Clostridial Diseases of Animals. The Clostridia: Molecular Biology and Pathogenesis. 1997

SONGER, J.G.; UZAL, F.A. Clostridial enteric infection in pig. Vol. 17. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation. 2005.

VIEIRA, A.A.S.; GUEDES, R.M.C.; SALVARANI, F.M.; SILVA, R.O.S.; ASSIS, R.A.; LOBATO, F.C.F. Genotipagem de Clostridium perfringens isolados de leitões diarreicos. Vol. 75. Arquivo Instituto Biológico. 2008